液相色譜儀已經(jīng)遍布各大高校，研究所，醫(yī)院，生化企業(yè)實(shí)驗(yàn)室等等。而市場(chǎng)上的液相色譜儀是五花八門，每個(gè)儀器的不同部件的性能又是多鐘多樣，相對(duì)于時(shí)間緊缺的實(shí)驗(yàn)人員來(lái)說(shuō)，也沒有很多精力去逐個(gè)挑選甄別。因此在此對(duì)液相色譜儀做個(gè)簡(jiǎn)單分析。
液相色譜儀由包括輸液系統(tǒng)，進(jìn)樣系統(tǒng)，分離系統(tǒng)，檢測(cè)系統(tǒng)，數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，輸助設(shè)備(色譜柱恒溫箱等)幾大部分組成的。但是在機(jī)器工作的同時(shí)還需要樣本處理設(shè)備的支持。只有各個(gè)部分都能協(xié)調(diào)的運(yùn)作才能發(fā)揮出機(jī)器的*的性能。因此我們?cè)谶x擇儀器的時(shí)候需要充分考慮到儀器的方方面面才能拿到自己滿意的機(jī)器。
先從液相色譜儀常規(guī)的幾個(gè)部件做個(gè)簡(jiǎn)單的分析。
(一)輸液泵應(yīng)具備如下性能：
?、?RSD(流量穩(wěn)定性)<0.3%;
② 流量范圍寬， 0.1～5.0ml/min內(nèi)連續(xù)可調(diào)，有的實(shí)驗(yàn)則需要更大流量;
③ 輸出壓一般應(yīng)能達(dá)到150~400 kg/cm2,流量越大,zui高壓力越低;
?、?液缸容積小,有助于減少流動(dòng)相死體積，利于清洗。
?、?密封性能好，耐腐蝕。
(二)檢測(cè)器
①紫外檢測(cè)器，分為可變單波長(zhǎng)檢測(cè)器VWD和二極管陣列檢測(cè)器DAD，可以檢測(cè)有紫外吸收的物質(zhì)
②熒光檢測(cè)器，檢測(cè)有熒光的物質(zhì)
?、垡暡钫酃鈾z測(cè)器，通用型檢測(cè)器，但對(duì)環(huán)境要求極為苛刻，而且靈敏度低
?、蹺LSD，蒸發(fā)光散射檢測(cè)器
?、軲SD，質(zhì)譜檢測(cè)器
常用的是紫外檢測(cè)，然后是MSD和ELSD
(三)色譜柱
要求柱效高、選擇性好，分析速度快等。目前市場(chǎng)上銷售的用于HPLC的各種微粒填料如多孔硅膠以及以硅膠為基質(zhì)的鍵合相、有機(jī)聚合物微球(包括離子交換樹脂)、氧化鋁、多孔碳等，其粒度一般為3,5,7,10μm等，柱效理論值可達(dá)5~16萬(wàn)/米。
一般的分析只需5000塔板數(shù)的柱效;同系物分析500即可;難分離物則可用2萬(wàn)的柱子。
因此一般10~30cm左右的柱長(zhǎng)基本能滿足復(fù)雜混合物分析的需要。所以要根據(jù)自己實(shí)際情況來(lái)選擇合適的柱子。
柱效受柱內(nèi)外因素影響，為使色譜柱達(dá)到*效率，除柱外死體積要小外，還要有合理的柱結(jié)構(gòu)(盡可能減少填充床以外的死體積)及裝填技術(shù)。即使的裝填技術(shù)，在柱中心部位和沿管壁部位的填充情況總是不一樣的，靠近管壁的部位比較疏松，易產(chǎn)生溝流，流速較快，影響沖洗劑的流形，使譜帶加寬，這就是管壁效應(yīng)。這種管壁區(qū)大約是從管壁向內(nèi)算起30倍粒徑的厚度。在一般的液相色譜系統(tǒng)中，柱外效應(yīng)對(duì)柱效的影響遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于管壁效應(yīng)。
此外，溫度在色譜分析中是個(gè)不容忽視的環(huán)境條件，環(huán)境溫度對(duì)溶劑的溶解能力、色譜柱的性能、流動(dòng)相的粘度都有影響。而且不同的檢測(cè)器對(duì)溫度的敏感度不一樣。保持恒定的溫度對(duì)實(shí)驗(yàn)而言是個(gè)不容忽視的條件，因此也要留意注溫箱的選擇。以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
(四)進(jìn)樣器
進(jìn)樣裝置要求：密封性好，重復(fù)性好，死體積小，保證中心進(jìn)樣，進(jìn)樣時(shí)對(duì)色譜系統(tǒng)的壓力、流量影響小。而且進(jìn)樣方式多種多樣，可分為隔膜進(jìn)樣、停流進(jìn)樣、閥進(jìn)樣、自動(dòng)進(jìn)樣。自動(dòng)進(jìn)樣器則是市場(chǎng)發(fā)展的趨勢(shì)。
(五)數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)
一般專業(yè)的液相色譜儀生產(chǎn)廠家都有自己配套的液相色譜儀控制軟件。但有不少液相色譜儀可以使用通用型的色譜數(shù)據(jù)工作站進(jìn)行數(shù)據(jù)計(jì)算處理。進(jìn)口軟件價(jià)格比較高，這個(gè)自己得根據(jù)資金選擇了。
二元泵和四元泵的區(qū)別二元有兩個(gè)泵，泵后混合，氣體的溶解度隨壓力的增大而增大，所以二元高壓混合不會(huì)產(chǎn)生氣泡。四元只一個(gè)泵(另外一個(gè)是輔泵)，是泵前混合，在常壓下進(jìn)行的，兩種液體混合時(shí)，會(huì)降低氣體在混合溶液中的溶解度，通常會(huì)有氣泡產(chǎn)生，所以四元低壓梯度系統(tǒng)一定要配在線真空脫氣機(jī)。
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